細(xì)菌質(zhì)體需藉轉(zhuǎn)形 （transformation） 技術(shù)

細(xì)菌質(zhì)體需藉由轉(zhuǎn)形 （transformation） 的技術(shù)，將的引介入細(xì)菌體中，藉由寄主細(xì)菌的系統(tǒng)達(dá)成復(fù)制或進(jìn)基因表現(xiàn)的目的。寄主細(xì)菌的選擇，須視質(zhì)體的種類及實驗的目的而定。本實驗的目的在建構(gòu)一個表現(xiàn)質(zhì)體，使的能在大腸桿菌中大表現(xiàn) GUS。蛋白

然而，用大腸桿菌進(jìn)外源基因的表現(xiàn)時，常遇到的問題是，外源基因的產(chǎn)物會對寄主細(xì)菌造成傷害；此外，持續(xù)斷的表現(xiàn)外源基因也會使寄主細(xì)菌生長減慢或無法生長。因此，必須有適當(dāng)?shù)恼{(diào)控機(jī)制控制外源基因的表現(xiàn)。蛋白 我們所用的載體pQE31 在T5 promoter與外源基因插入地址的間，具有一段lac operon中的lacO序，可用lac repressor結(jié)合其上調(diào)控T5 promoter的啟動，只有在inducer （如IPTG） 加入時，才會啟動轉(zhuǎn)錄的進(jìn)，而lac repressor的源則必須靠寄主提供。

由于此質(zhì)體為multiple copies，一般大腸桿菌菌株中l(wèi)ac repressor的含足以有效地進(jìn)調(diào)控，縱使未加入inducer，也會有外源蛋白質(zhì)的表現(xiàn)，萬一外源蛋白質(zhì)對寄主造成毒害，使的無法生長，我們可能表現(xiàn)質(zhì)體無法選殖到，無法達(dá)成我們的實驗?zāi)康摹?我們所選用的寄主菌株JM109 所具有的 lacIq，能夠過表現(xiàn) （overproduce） lac repressor，因此可較有效地控制T5 promoter的啟動。 然而，是JM109 這一類帶有l(wèi)acIq的菌株發(fā)生問題時，就必須再換其它的寄主菌株；如M15[pREP4]，此菌株除染色體上的lacI基因外，還帶有能持續(xù)表現(xiàn)lacrepressor的質(zhì)體，應(yīng)可解決lac repressor 足的問題。