Elisa檢測實驗有很多關(guān)鍵技術(shù)點,在前面的資訊內(nèi)容中也為大家介紹過不少。近段時間,不少的客戶通過留言或來電都咨詢過ELISA試劑盒加樣的技巧,今日,我司就為大家詳細介紹:
1.細胞上清:
前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋。
2.腦脊液:
前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋。
3.組織勻漿液的樣本
要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑,防止蛋白成份被內(nèi)源性蛋白酶降解,造成檢測結(jié)果的值偏低。因組織勻漿液的樣本蛋白種類多,含量豐富,實驗參照血清血漿標本的處理方法進行,否則就會影響實驗結(jié)果。具體是加入50 ul樣本分析緩沖液后加50 ul標本,需稀釋時,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
4.血清血漿:
請加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
A 血清標本應是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;
B 血漿標本,推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測,標本收集后請分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融。
C 血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑;
D 標本應清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。
E 請勿使用溶血,高血脂或污染的標本檢測,否則結(jié)果將不準確。
因為目標蛋白不同,可能造成降解的蛋白類型可能不一樣,如果實驗前通過文獻確定用哪種蛋白酶抑制劑,有針對性加入,可節(jié)省抑制劑。如果查不到相關(guān)文獻,可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解。