臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本是指為完成某項(xiàng)或多項(xiàng)臨床化學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目而采集的一定量的血液,包括抗凝及非抗凝血。而Elisa試劑盒檢測(cè)中血液樣本可以是多個(gè)種類,比如,人,大鼠,小鼠等動(dòng)植物。
標(biāo)本類型
臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本分為血清、血漿和全血3種。血清和血漿為臨床常用,除前者不含纖維蛋白原外,其余多數(shù)化學(xué)成分無(wú)差異;全血只有在紅細(xì)胞內(nèi)成分與血漿成分相似時(shí)才用;血?dú)夥治?、血紅蛋白電泳等時(shí)用全血,一般臨床化學(xué)分析多不用全血。
全血處理為血清或血漿
血液標(biāo)本采取后應(yīng)盡可能早地自然地使血清(漿)從與血細(xì)胞接觸的全血中分離出來(lái)。
一般應(yīng)于采血后2h內(nèi)分離出血清或血漿。全血處理為血清或血漿分為離心前、離心中和離心后三個(gè)階段,對(duì)各不同階段均有具體要求。
(一)離心前階段
即指標(biāo)本采集到離心處理前的一段時(shí)間。
1.血清:標(biāo)本離心前一般應(yīng)令其自行凝集,不可用木棍等剝離凝血塊。
通常于室溫(22~25℃)放置30~60min血標(biāo)本可自發(fā)完全凝集;冷藏標(biāo)本凝集緩慢;加促凝劑時(shí)凝集加快(標(biāo)本采集后應(yīng)輕輕顛倒混合5~10次,以確保促凝劑作用)。
2.血漿:需用血漿標(biāo)本時(shí),必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,而且采血后必須立即輕輕顛倒采血管混合5~10次(以確保抗凝劑發(fā)揮作用),5~10min后即可分離出血漿。
3.冷藏標(biāo)本:標(biāo)本冷藏可抑制細(xì)胞代謝,穩(wěn)定某些溫度依賴性成分但全血標(biāo)本一般不能冷藏;血鉀測(cè)定標(biāo)本冷藏不得超過(guò)2h.血液中兒茶酚胺、pH/血?dú)?、氨、乳酸、丙酮酸、胃泌素、甲狀腺激素等檢測(cè)時(shí)需用制冷的標(biāo)本。
標(biāo)本需要冷藏(2~8℃)時(shí),標(biāo)本采取后應(yīng)立即將標(biāo)本置于冰屑或冰水混合物(不可用大冰塊),并且必須保證標(biāo)本與制冷物充分接觸,保證制冷物達(dá)到標(biāo)本的高度。
4.代謝抑制劑和防腐劑:某些添加劑加入血液標(biāo)本中能抑制細(xì)胞代謝,可以防止血液標(biāo)本貯存時(shí)分析物濃度的變化。
血液葡萄糖測(cè)定時(shí),如在血液中加入氟化鈉,在血細(xì)胞未分離的情況下,葡萄糖在22~25℃時(shí)可穩(wěn)定24h,2~8℃時(shí)可以穩(wěn)定48h;但在新生兒和兒童標(biāo)本,由于紅細(xì)胞壓積高,用氟化鈉難以控制細(xì)胞的糖酵解作用;甲醛-草酸鉀抗凝保存劑不適合血糖測(cè)定;氟化鈉-麝香草酚混合劑因能抑制酶活性,不適用于酶學(xué)測(cè)定。
5.標(biāo)本采集現(xiàn)場(chǎng):(1)標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送往實(shí)驗(yàn)室,尤其當(dāng)收集區(qū)溫度超過(guò)22℃時(shí)此點(diǎn)更為重要;(2)血液標(biāo)本采集后血管必須加塞、管口向上、垂直放置,以減少管中內(nèi)容物振動(dòng),促進(jìn)凝血完全,防止標(biāo)本蒸發(fā)、污染和外濺等;(3)已收集的血液標(biāo)本應(yīng)溫和地處理,要防止標(biāo)本管振蕩所造成的溶血;溶血可影響測(cè)定結(jié)果。
有嚴(yán)重影響(使結(jié)果升高)的項(xiàng)目有:乳酸脫氫酶、血清門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、血清鉀和血紅蛋白;引起值得注意的影響的項(xiàng)目有:血清鐵(↑)、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(↑)和血清甲狀腺素(↓);輕度受影響(增加)的有:總蛋白、白蛋白、血清磷、血清鎂、血清鈣和酸性磷酸酶;
6.標(biāo)本運(yùn)送:全血標(biāo)本應(yīng)盡快從采血現(xiàn)場(chǎng)運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室,如果運(yùn)送距離較遠(yuǎn),特別是因分析物穩(wěn)定性有影響,必要時(shí)可于采血現(xiàn)場(chǎng)分離出血清或血漿后,再送往實(shí)驗(yàn)室;標(biāo)本運(yùn)送過(guò)程中要注意標(biāo)本的包裝、溫度要求、處理方法等,要確保分析成分的穩(wěn)定性;標(biāo)本管在運(yùn)送過(guò)程中要保持管口封閉、向上垂直放置。
7.實(shí)驗(yàn)室接受標(biāo)本及離心標(biāo)本準(zhǔn)備:(1)要有標(biāo)本收取記錄(應(yīng)認(rèn)真核對(duì)檢驗(yàn)中清單,對(duì)有關(guān)情況要認(rèn)真記錄,標(biāo)本接收及處理應(yīng)簽字登記);
(2)對(duì)接受的標(biāo)本要予以分類準(zhǔn)備離心;(3)實(shí)驗(yàn)室接受標(biāo)本后應(yīng)仍保持標(biāo)本管于密閉封口、管口向上,垂直位放置。管塞移去后血中CO2丟失,會(huì)造成pH增加,離子鈣和酸性磷酸酶減少,尤其pH變化會(huì)影響某些檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性;(4)標(biāo)本凝集時(shí)間要充分;加抗凝劑的血液標(biāo)本可以立即離心;加促凝劑的標(biāo)本可于采血后5~15min盡早離心;抗凝的全血標(biāo)本(鋅、鋰、原卟啉等測(cè)定時(shí))可以不離心;(5)冷藏(2~8℃)標(biāo)本應(yīng)保持這個(gè)溫度直到準(zhǔn)備離心。推薦用溫度控制離心機(jī);(6)離心標(biāo)本前不主張用小木棒或類似器材去剝離附著于試管壁和管塞上的凝塊,人為剝離會(huì)誘導(dǎo)溶血。如果必須露出試管壁或取下管塞時(shí),一定要十分注意,動(dòng)作一定要輕柔。
(二)離心階段
即指標(biāo)本處于離心機(jī)里的一段時(shí)間。
1.離心時(shí)間和相對(duì)離心力(RCF):臨床化學(xué)分析血液標(biāo)本離心時(shí),RCF(1000~1200)xg,離心時(shí)間為5~10min.
2.溫度控制離心:離心時(shí)產(chǎn)熱不利于分析物穩(wěn)定,臨床化學(xué)分析血液標(biāo)本離心時(shí)必須采用溫度控制離心機(jī)。一些溫度依賴性分析物(如促腎上腺皮質(zhì)激素、環(huán)腺苷酸、兒茶酚胺等)應(yīng)在4℃分離;無(wú)特殊溫度要求的分析物,離心溫度應(yīng)設(shè)定在20℃~22℃;溫度低于15℃可以人為地使血鉀測(cè)定值增高;冷藏運(yùn)送的標(biāo)本必須在要求的溫度下離心。
3.關(guān)于再離心:標(biāo)本離心最好一次完成,若需再次離心,應(yīng)距上次離心相隔時(shí)間很短;對(duì)于含有分離物質(zhì)的血標(biāo)本絕不可以再離心。
(三)離心后階段
指標(biāo)本離心后和用于檢測(cè)的血清或血漿被取出一定量之前的一段時(shí)間。
1.血清或血漿與接觸的血細(xì)胞和凝塊的分離應(yīng)在采血后盡快(2h內(nèi))完成。
2.分離的血清或血漿的貯存:實(shí)驗(yàn)室的室溫和血清或血漿的貯存溫度、時(shí)間,是分析物穩(wěn)定性和測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的重要參數(shù)。
(1)于22℃~25℃血清或血漿的保存不超過(guò)8h;
(2)實(shí)驗(yàn)于8h內(nèi)不能完成時(shí),血清或血漿應(yīng)置2℃~8℃保存;
(3)48h內(nèi)不能完成的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,或分離的血清或血漿需貯存48h以上時(shí),應(yīng)于-20℃保存;
(4)標(biāo)本不可反復(fù)凍融(只能凍融一次),且不可貯存于無(wú)霜冰箱(可造成樣品溫度變化);
(5)離心后分離凝膠(凝膠屏障)上面的血清可保存2~5天(亦有報(bào)道4℃可貯存24h),但必須保證凝膠的完整性;但應(yīng)用非凝膠分離物質(zhì)時(shí),離心后必須立即將血清或血漿移出。
(6)血清或血漿必須保存于密閉的試管中。
ELISA實(shí)驗(yàn)中血清的采集、處理和保存;
1、 真空采血針采集2ml新鮮血液,加入無(wú)菌試管中;
2、 采血后室溫靜置1小時(shí);
3、 將采集血液用離心機(jī)4℃,2500rpm離心10min,,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。
4、 取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?br data-filtered="filtered"/>2-8℃下,可放置保存24-48小時(shí);
-20℃下,可放置保存1個(gè)月;
-70℃下,可放置保存6個(gè)月;
5、 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要,取適量上清夜進(jìn)行各種ELISA測(cè)定。
大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的 ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。此外還應(yīng)避免細(xì)菌污染,因?yàn)榫w中可能含有含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。血清標(biāo)本宜在新鮮 時(shí)檢測(cè)。如在冰箱中保存過(guò)久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。