ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中顯色步驟的操作方法

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中顯色是最后一步溫育反響，此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)品。

恰當(dāng)進(jìn)步溫度有助于加快顯色進(jìn)行。

在定量測(cè)定中，參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確。

定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)刻通常不需要嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯色狀況恰當(dāng)縮短或延伸反響時(shí)刻，及時(shí)判別。 

OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，再延伸反響時(shí)刻，可使本底值增高。

反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的要素。

在必定時(shí)刻內(nèi)，陰性孔可堅(jiān)持無色，而陽性孔則隨時(shí)刻的延伸而呈色加強(qiáng)。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)OPD底物液受光照會(huì)自行變色，顯色反響應(yīng)避光進(jìn)行，顯色反響結(jié)束時(shí)參加停止液停止反響。

TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反響停止。

這類停止劑尚能使藍(lán)色保持較長(zhǎng)時(shí)刻（12-24小時(shí)）不褪，是目視判別的良好停止劑。

ELISA試劑盒此外，各類酸性停止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此刻可用特定的波長(zhǎng)（450nm）測(cè)讀吸光值。

OPD產(chǎn)品用硫酸停止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。

TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反響觀察成果。

但為確保試驗(yàn)成果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)則的恰當(dāng)時(shí)刻閱覽成果。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)高峰，隨即逐漸削弱，至2小時(shí)后即可徹底衰退至無色。