western blot蛋白條帶風(fēng)吹狀或者漩渦狀或者western blot少條帶的原因

很多的國農(nóng)在研究蛋白質(zhì)的時候最常用的是免疫印跡法，也就是western blot，在做western blot的時候，有的師弟師妹常常問我怎么我的western blot蛋白少了條帶，有的問為什么我的western blot蛋白就好像讓風(fēng)吹了一樣，或者流水狀、漩渦狀。在這里我就給大家總結(jié)一下，出現(xiàn)上述情況的原因，希望給廣大國農(nóng)帶來幫助。

1、印跡膜和凝膠沒有密切的接觸，在兩者之間存在氣泡，沒有壓緊或者過量的緩沖液都會出現(xiàn)這種情況
解決方法：
1）、使用滾筒小心驅(qū)趕印跡膜與凝膠間的氣泡，或者過量的緩沖液
2）、在凝膠和印跡膜兩側(cè)使用較厚的濾紙，或者多放幾層
3）、更換纖維墊，纖維墊長時間使用會變薄

2、電源條件使用不當(dāng)
開始前要核實電流，在特定電壓下，電流可能過高，如果緩沖液使用不當(dāng)，導(dǎo)電率太高，引起電場強度太大，出現(xiàn)過熱現(xiàn)象

3、印跡膜沒有完全潤濕
1)、硝酸纖維膜上的白色斑點表明其潤濕不完全，使蛋白不能與其完全結(jié)合
2）、PVDF膜具有疏水的特性，放入轉(zhuǎn)印緩沖液中的前，必須將膜放到甲醇中潤濕

4、電泳效果差
凝膠聚合不徹底，運行時間不夠，緩沖液污染、樣品過載等引起電泳效果差