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HMC1細(xì)胞/人肥大細(xì)胞HMC-1

種屬	人
別稱	HMC1
組織來源	癌細(xì)胞系
疾病	肥大細(xì)胞白血病
傳代比例/細(xì)胞消化	1:2傳代
完全培養(yǎng)基配置	IMDM培養(yǎng)基 ；10%胎牛血清 ；1%雙抗
形態(tài)	淋巴細(xì)胞樣
生長特征	懸浮生長
STR	Amelogenin X CSF1PO 10,13 D2S1338 17,25 D3S1358 15 D5S818 12,13 D7S820 10,11 D8S1179 12 D13S317 10,11 D16S539 10,12 D18S51 14,20 D19S433 14 D21S11 29 FGA 18,20 Penta D 11 Penta E 9,19 TH01 7,9.3 TPOX 8,11 vWA 17,19
倍增時間	每周 2-3次
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
凍存條件	凍存液：90%FBS，DMSO 10%, 或使用非程序凍存液
備注	該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請注意離心收集細(xì)胞懸液，請勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。
產(chǎn)品使用	于科學(xué)研究，不可作為動物或人類疾病的 產(chǎn)品使用。

HMC1細(xì)胞/人肥大細(xì)胞HMC-1

來源于一名 52 歲男性肥大細(xì)胞白血病患者的外周血樣本。該細(xì)胞有多重亞型分別為：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。廣泛用于人肥大細(xì)胞功能研究，因為它們表現(xiàn)出組織肥大細(xì)胞的許多關(guān)鍵特征，例如組胺、類胰蛋白酶、肝素和類似細(xì)胞表面抗原譜的表達(dá) （1,2）。受體酪氨酸激酶 KIT 在肥大細(xì)胞上表達(dá)，在肥大細(xì)胞的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT 中的激活突變與肥大細(xì)胞生長失調(diào)有關(guān)，并與肥大細(xì)胞腫瘤和系統(tǒng)性肥大細(xì)胞增多癥有關(guān)。據(jù)報道，HMC-1 細(xì)胞系中存在兩個 KIT 激活點(diǎn)突變 。這兩種突變都將受體轉(zhuǎn)化為組成型酪氨酸磷酸化和活性狀態(tài)，導(dǎo)致生長因子非依賴性增殖。HMC-1.1 （HMC-1（560）） 和 HMC-1.2 （HMC-1（560,816）） 是HMC-1 細(xì)胞系的兩個變異亞系。HMC-1.1 具有 V560G 突變，但不具有 D816V 突變。HMC-1.2 同時具有 V560G 和D816V 突變，并且表現(xiàn)出比 HMC-1.1 更高的增殖率。有人認(rèn)為，HMC-1.2 的較高增殖潛力可能歸因于 D816V 突變。

運(yùn)輸和保存：

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

 

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

 

細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。 天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

懸浮細(xì)胞參考：

大多數(shù)懸浮細(xì)胞對于環(huán)境比較敏感，建議一直維持高密度生長，一般情況下細(xì)胞密度維持在 1×10 ⁵ 到 1×10 ⁶個/mL（不同細(xì)胞對密度要求不同）。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中 800-1000rpm，離心 5min，棄去上清，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例（ 可以 1:1 分瓶）分到新 T25 瓶中，添加5-6ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2 和以上比例進(jìn)行。大多數(shù)血液類相關(guān)的懸浮細(xì)胞受運(yùn)輸影響比較大，會出現(xiàn)一批死細(xì)胞，如果因此密度降低了，可以離心后轉(zhuǎn)移至 T25 瓶中豎著培養(yǎng)，培養(yǎng)基添加 5ml 以提高總體密度，隔一天后觀察密度可以的話再補(bǔ)液 3ml 完全培養(yǎng)基后 T25 瓶放倒，等沉淀穩(wěn)定后觀察細(xì)胞密度，持續(xù)添加培養(yǎng)基等密度上升足夠傳代為止。

3）細(xì)胞凍存:

收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例；

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

 

注意事項：

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。