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| 產(chǎn)地 | 中國/美國 |
| 品牌 | KALANG/進(jìn)口品牌 |
| 貨號(hào) | kl-CC337670 |
| 保存條件 | 50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮 |
| 英文名稱 | EBTr (NBL-4) |
| 保質(zhì)期 | 12個(gè)月個(gè)月 |
EBTr (NBL-4)牛胚氣管細(xì)胞完全培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%
細(xì)胞生長：貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)：上皮樣；多角形
細(xì)胞傳代：1:2-1:4傳代；每周2-3次
EBTr (NBL-4)牛胚氣管細(xì)胞凍存步驟：我們實(shí)驗(yàn)室是按1:3:6 配凍存液1份甘油3份血清和6份培養(yǎng)基(養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用什么培養(yǎng)基凍存時(shí)就用什么培養(yǎng)基):
⑴ 吸出舊培養(yǎng)液加PBS沖洗一次
⑵ 胰酶消化
⑶ 加培養(yǎng)基中止消化，有的細(xì)胞是加血清中止
⑷ 離心收集細(xì)胞，不同細(xì)胞離心率不一樣（以上僅為貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞收集就用第四部）
⑸ 吸出離心管上清液，加1ML 的凍存液重懸細(xì)胞，移到凍存管，放4度半小時(shí)，-20 度兩小時(shí)，-70度過夜，再放液氮長期保存。
EBTr (NBL-4)牛胚氣管細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟如下：
1 將培養(yǎng)基置于37℃回溫，回溫后將其用75%酒精擦拭，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)；
2 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套之后，從液氮罐中取出細(xì)胞冷凍管。若凍存管內(nèi)有液氮進(jìn)入，需擰松凍存管，排出內(nèi)部殘留的液氮，之后擰緊凍存管，放入37-40℃水浴中，并不時(shí)搖動(dòng)，使其迅速融化，以足量75%酒精擦拭之，轉(zhuǎn)移到已加入10ml培養(yǎng)液的離心管內(nèi)；
3 在1,000 rpm下離心5～10分鐘，棄去上清液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，置 5% CO2溫箱靜置培養(yǎng)；
4 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。若細(xì)胞密度較高，及時(shí)傳代；否則，及時(shí)更換培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
EBTr (NBL-4)牛胚氣管細(xì)胞復(fù)蘇注意事項(xiàng)如下：
A.復(fù)蘇細(xì)胞請(qǐng)一定要注意安全，尤其是來自客戶的細(xì)胞。在放入液氮容器之前就應(yīng)該檢查凍存管是否擰緊。取出復(fù)蘇時(shí)若有液氮進(jìn)入，請(qǐng)一定要擰松凍存管，排出液氮，防止溫度升高時(shí)爆炸。
B. 細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)需使用指定培養(yǎng)液。絕大多數(shù)細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同的血清種類，若因?qū)嶒?yàn)需要，必須有所不同，須以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
C. 細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)可以暫時(shí)不使用抗生素（G418等），以利于細(xì)胞的恢復(fù)。
D.細(xì)胞復(fù)蘇前需檢查恒溫水浴鍋的溫度是否已經(jīng)適宜。
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