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| 產(chǎn)地 | 中國(guó)/上海 |
| 品牌 | KALANG |
| 貨號(hào) | KL90408-1 |
| 英文名稱 | Instant Fluorescent qPCR Kit |
| 包裝規(guī)格 | 1mL |
| 純度 | 99% |
| CAS編號(hào) | |
| 別名 | 即用型熒光定量PCR試劑盒 |
| 分子式 |
即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn)
本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測(cè)的即用型雙酶一管式RT-PCR試劑盒，可以對(duì)靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量RT-PCR分析（quantitative RT-PCR、qRT-PCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過(guò)優(yōu)化的緩沖液組分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型熒光染料DNAgreen等所有一管式實(shí)時(shí)定量RT-PCR所需要的成分，用戶只需加入RNA模板和引物即可進(jìn)行實(shí)時(shí)定量RT-PCR反應(yīng)，具有廣泛的用途。
一管式完成qRT-PCR反應(yīng)，避免樣品交叉污染，尤其適合臨床應(yīng)用。
即開(kāi)即用，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備qRT-PCR所需的各種試劑。
主要成分只有兩個(gè)（RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix），將加樣步驟減少到*，極大降低了加樣誤差，增加了可重復(fù)性。
使用范圍廣，適用于從病毒RNA到人RNA的各種RNA模板。
高靈敏度，每個(gè)RT-PCR體系*可以檢測(cè)200拷貝的RNA分子，可擴(kuò)增的模版RNA的最長(zhǎng)達(dá)2000 nt。
即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒規(guī)格及成分
成 份
50次
塑料袋包裝
300次
塑料袋包裝
雙酶一管式qRT-PCR Buffer，2×
750 uL
4.5 mL
MMLV-Taq Mix
100 uL
600 uL
RNase-free水
1 mL
6 mL
即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒使用手冊(cè)
1份
1份
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存, 保存期限為一年。
自備試劑
RNA模板、引物。有的機(jī)型需要自備ROX。
使用方法
在一干凈的無(wú)RNase的PCR管中，先加入下列成分（下面只列出樣品管的設(shè)置情況，用戶可自己根據(jù)需要設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照）：
成分
樣品
自備RNA模板（分下面三種情況）
見(jiàn)下
總RNA
100-500 ng
或poly(A) mRNA
10-500 ng
或體外轉(zhuǎn)錄得到的專(zhuān)一RNA
0.01 pg-500ng
RNA特異性引物一（自備）
終濃度300nM（注1）
RNA特異性引物二（自備）
終濃度300nM
RNase-free水
補(bǔ)到10 uL
雙酶一管式qRT-PCR Buffer（2×）
15 uL
自備ROX（某些熒光PCR機(jī)型需要）
3 uL（注2）
MMLV-Taq Mix
2 uL
即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒注1：通常初次使用本試劑時(shí)，可用引物濃度300nM進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體情況，在200～800nM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。引物、待檢樣品的具體加量用戶可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整，同時(shí)增減RNase-free水用量，保證總反應(yīng)體積不變即可。
注2：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三種型號(hào)的熒光PCR儀器，則需用自備的ROX進(jìn)行Ct值校正。對(duì)ABI 7700和7900，ROX的*濃度為1×（即在每30 uL 反應(yīng)體系中加3 uL 10×ROX）。對(duì)ABI 7500， ROX的*濃度為0.05-0.1×（每30 uL 反應(yīng)體系加0.3 uL 10×ROX；也可將10×ROX稀釋到1×，然后每個(gè)反應(yīng)體系加入3 uL 1×ROX）。ROX會(huì)在溶解曲線中產(chǎn)生噪音，因此，如果出現(xiàn)了雜峰，將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項(xiàng)取消打勾，然后重新分析數(shù)據(jù)。對(duì)于iCycler IQ, MJ Opticon, MJ Chromo4, MX3000, MX4000, RotorGene3000, RotorGene 6000 和 LightCycler 480等型號(hào)的熒光PCR儀器，ROX不是必須的，但加入的話也不會(huì)影響整個(gè)PCR分析。
輕柔混合均勻后放入PCR儀中進(jìn)行熒光定量RT-PCR。
設(shè)定RT-PCR反應(yīng)條件時(shí)，一般將RT的條件設(shè)定成42℃ 30分鐘，后接94℃變性5分鐘，然后進(jìn)入PCR循環(huán)（PCR參數(shù)將根據(jù)自備引物的Tm值和PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度由用戶自行決定注）、*72℃ 5分鐘。并在退火或延長(zhǎng)步驟中記錄熒光信號(hào)。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒(méi)結(jié)合DNA時(shí)，*吸收光譜在471nm，結(jié)合DNA時(shí)的*吸收光譜在500nm，*發(fā)射光譜在530nm。
即用型熒光定量PCR試劑盒-熒光試劑盒關(guān)聯(lián)產(chǎn)品
即用型熒光定量PCR試劑盒、PCR級(jí)綠如藍(lán)染料。
